Interested Article - Искусственная бактериальная хромосома

Искусственная бактериальная хромосома ( англ. bacterial artificial chromosome, BAC ) — векторная система на основе F-плазмиды E. coli , участков cos фага лямбда и loxP фага Р1, используемая для клонирования длинных (150—350 тыс. п.н.) последовательностей ДНК . F-плазмида кодирует гены, регулирующие репликацию и контролирующие копийность (1—2 молекулы на клетку). По участку loxP плазмидная ДНК может быть расщеплена белком Cre фага Р1, по cos-участку — соответствующим ферментом фага лямбда. Схожая векторная система под названием PAC ( англ. p1-derived artificial chromosome ) была сделана на основе бактериальной P1-плазмиды из ДНК фага P1.

Искусственные бактериальные хромосомы часто используются для секвенирования геномов организмов в различных проектах, например в проекте Геном человека . Короткий фрагмент ДНК исследуемого организма вставляется в хромосому, а затем амплифицируется и секвенируется. После этого прочитанные последовательности выравниваются in silico в результате чего получается полная последовательность генома организма. Сейчас такой подход был вытеснен более быстрыми и менее трудоёмкими методами секвенирования, например методом дробовика или методами секвенирования нового поколения .

Генетические компоненты

repE: регулирует репликацию и количество копий плазмиды.
и: для распределения ДНК F-плазмиды в дочерние клетки во время деления и стабильного поддержания хромосомы.
Селективный маркёр: часто ген устойчивости к антибиотикам ; в некоторых также содержится lacZ в месте клонирование гена, что позволяет проводить бело-голубую селекцию.
T7 и Sp6: фаговые промоторы для транскрипции вставленных генов.

См. также

Примечания

Stone N. E., Fan J-B, Willour V., , Warrington J. A., Hu A., Chapelle A., Lehesjoki A-E, Cox D. R., Myers R. M. Construction of a 750-kb bacterial clone contig and restriction map in the region of human chromosome 21 containing the progressive myoclonus epilepsy gene (англ.) // (англ.) ( : journal. — 1996. — Vol. 6 , no. 3 . — P. 218—225 . — doi : . — .
O'Connor M., Peifer M., Bender W. Construction of large DNA segments in Escherichia coli (англ.) // Science : journal. — 1989. — Vol. 244 , no. 4910 . — P. 1307—1312 . — doi : . — .
Shizuya H., Birren B., Kim U-J, Mancino V., Slepak T., Tachiiri Y., Simon M. Cloning and stable maintenance of 300-kilobase-pair fragments of human DNA in Escherichia coli using an F-factor-based vector (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 1992. — Vol. 89 , no. 18 . — P. 8794—8797 . — doi : . — . — PMC .
Shizuya, H; Kouros-Mehr Hosein. (англ.) // Keio J Med. : journal. — 2001. — Vol. 50 , no. 1 . — P. 26—30 . — doi : . — . 11 января 2017 года.