Interested Article - Изотахофорез

Этапы разделения двух образцов при помощи изотахофореза:
Белый цвет — ведущий электролит, серый — замыкающий электролит, заштрихованы — анализируемые образцы

Изотахофорез (ИТФ) — метод разделения различных типов ионов по их подвижности в электрическом поле . При ИТФ все виды ионов мигрируют в одном направлении, образуя набор зон, находящихся в равновесном состоянии и перемещающимися с одинаковыми скоростями.

Теоретические основы метода

В основе метода ИТФ лежит система, состоящая из трех различных электролитов , объединенных общим противоионом:

ведущий электролит , содержащий анионы с наиболее высокой электрофоретической подвижностью, располагается в анодной области;
замыкающий электролит , содержащий анионы с минимальной подвижностью, располагается в катодной области;
смесь электролитов анализируемой смеси, содержащая анионы с промежуточной подвижностью.

Если через эту систему пропустить электрический ток , то анионы расположатся последовательно в соответствии с их электрофоретической подвижностью, ведущий в области анода , замыкающий в области катода , остальные между ними в виде узких зон с четкими концентрационными границами. Ширина отдельных зон по завершении процесса соответствует абсолютному количеству в смеси того или иного аниона .

Поскольку отдельные зоны располагаются последовательно. они практически соприкасаются, поэтому в исследуемый образец вносят буферный раствор , содержащий анион с промежуточной подвижностью, зона которого встроится в полученную последовательность и раздвинет зоны исследуемых анионов . Эти вспомогательные зоны называются спейсерами — разделителями, функции которых выполняют амфолиты-носители, используемые в методе ИЭФ . особенностью метода ИТФ является то, что процесс сопровождается концентрированием зон, эффект от которого приводит к разрешению, сравнимому и даже превосходящему разделение методом ИЭФ . Результаты разделения смесей методом ИТФ фиксируются на ленте самописца в виде графика измерения трех параметров:

интегральная кривая тепловыделения: по этой кривой можно определить разницу температур между соседними зонами, что служит мерой градиента напряжённости электрического поля , то есть разницы электрофоретических подвижностью двух ионов
дифференциальная кривая тепловыделения: длина отрезков этой кривой соответствуют ширине зоны вещества, а также служит мерой абсолютного количества вещества в пробе
кривая поглощения в УФ-свете: длина отрезков этой кривой соответствует значению экстинкции вещества. Зная коэффициент молярной экстинкции вещества, можно определить абсолютное содержание вещества в пробе, а также вычислить его концентрацию в зоне.

Приборы для изотахофореза

Аналитический изотахофорез проводят в капиллярном приборе для изотахофореза, в тефлоновом капилляре с внутренним диаметром 0,5 мм.

Препаративный изотахофорез проводят в колонке с полиакриламидным гелем .

Применение изотахофореза

Аналитическое разделение (мкг) пептидов , белков , нуклеотидов , органических кислот , ионов металлов (частично изотопов ) с высоким разрешением.
Препаративное разделение белков (г).
Накопление в виде узкой зоны следовых количеств веществ (мкг) из больших объемов пробы вследствие эффекта концентрирования.
Определение электрофоретической подвижности.