Interested Article - Фрагмент Кленова

Функциональные домены в фрагменте Кленова (слева) и ДНК-полимераза I.

Фрагмент Кленова ( англ. Klenow fragment ) — это большой белковый фрагмент, образующийся при ферментативном расщеплении ДНК-полимеразы I из Escherichia coli протеазой субтилизином . Впервые фрагмент Кленова был описан в 1970 году, и имел 5’ → 3’-полимеразную активность в сочетании с 3’ → 5’- экзонуклеазной активностью (корректорной), но не имел 5' → 3'-экзонуклеазной активности .

Другие меньшие фрагменты, образующиеся при ферментативном расщеплении могли иметь 5'→ 3'-экзонуклеазную активность, но не имели двух активностей, характерных для фрагмента Кленова.

Фрагмент Кленова был использован в качестве ДНК-полимеразы в первых методиках полимеразной цепной реакции и лишь через некоторое время был заменен термостабильной Taq-полимеразой .

На данный момент используется для маркировки ДНК ("fill-in" 3' укороченных концов с помощью "random hexamers"), для секвенирования ДНК методом Сэнгера и для синтеза второй цепи ДНК.

Примечания

Klenow H and Henningsen I. (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 1970. — Vol. 65 . — P. 168—175 . — doi : . — .
Saiki RK et al. Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia (англ.) // Science : journal. — 1985. — Vol. 230 . — P. 1350—1354 . — doi : . — .
Saiki et al. Primer-directed enzymatic amplification of DNA with a thermostable DNA polymerase (англ.) // Science : journal. — 1988. — Vol. 239 . — P. 487—491 . — doi : . — .