Interested Article - N-Этилмалеимид

jan
  • 2020-10-18
  • 1

N -Этилмалеимид (НЭМ) — производное малеиновой кислоты . Он содержит имидную функциональную группу и представляет собой активированный алкен , который реагирует с тиолами и часто используется для модификации остатков цистеина в белках и пептидах .

Химические свойства

N -Этилмалеимид является акцептором Михаэля . Это означает, что он может присоединять нуклеофилы, такие как тиолы. Образовавшийся в результате такой реакции тиоэфир обладает очень прочной C–S-связью, и реакция является практически необратимой. Реакция протекает при рН 6,5—7,5. N -этилмалеимид может реагировать с аминами или подвергаться гидролизу при более щелочных рН. N -этилмалеимид широко использовался для определения функциональной роли тиольных групп в энзимологии . Он является необратимым ингибитором всех цистеиновых пептидаз, поскольку осуществляет алкилирование тиольных групп в активном центре (см. схему) .

Механизм необратимого ингибирования цистеиновых пептидазы.

Тематические исследования

НЭМ блокирует везикулярный транспорт . Лизисные буферы с 20—25 мМ N -этилмалеимида используются для ингибирования де-сумоилирования белков во время вестерн-блоттинга . НЭМ также используется в качестве ингибитора деубиквитинилирования .

Артур Корнберг и его коллеги использовали N -этилмалеимид, чтобы выключить ДНК-полимеразу III и сравнить её активность с ДНК-полимеразой I. Корнберг был удостоен Нобелевской премии за открытие ДНК-полимеразы I, которая в то время считалась главной полимеразой бактериальной репликации , хотя позже его сын Томас показал, что основной репликативной полимеразой у бактерий является ещё не открытая в то время ДНК-полимераза III.

N -Этилмалеимид активирует оуабаин-нечувствительное хлор -зависимое поступление ионов калия в красные кровяные тельца овец и коз . Шестнадцать лет спустя это открытие способствовало открытию K + /Cl - котранспортёров в клетках человеческих эмбрионов, в которые ввели кДНК изоформы по KCC1 . С тех пор N -этилмалеимид широко используется в качестве диагностического инструмента для определения наличия K + /Cl - симпортов в клетках разных видов животных .

Примечания

  1. 28 января 2008 года. at Invitrogen
  2. Nelson, D. L.; Cox, M. M. "Lehninger, Principles of Biochemistry" 3rd Ed. Worth Publishing: New York, 2000.
  3. Gregory, J. D. (1955) J. Am. Chem.
  4. A chloride dependent K+ flux induced by N ethylmaleimide in genetically low K+ sheep and goat erythrocytes.
  5. Gillen CM, Brill S, Payne JA, Forbush B 3rd: Molecular cloning and functional expression of the K-Cl cotransporter from rabbit, rat, and human.
  6. Regulation of K-Cl cotransport: from function to genes.
  7. K+ Cl Cotransport: Sulfhydryl, divalent cations and the mechanism of volume activation in a red cell.
  8. . doi : .
  9. Jennings, M. L. & Al-Rohil, N. S. J. gen. Physiol. 95, 1021−1040, 1990

Внешние ссылки

  • The online database for peptidases and their inhibitors: (недоступная ссылка)
  • The bifunctional analogues such as p-NN'-phenylenebismaleimide can be used as cross-linking reagent for cystine residues. see Lutter, L. C., Zeichhardt, H., Kurland, C. G. & Stoffier,G. (1972) Mol. Gen. Genet. 119, 357-366.
Источник —

jan
  • 2020-10-18
  • 1
  • Tags:

Same as N-Этилмалеимид

The title for the last searches