Ионообменная хроматография — частный случай ионной хроматографии , позволяющий разделять ионы и полярные молекулы на основании зарядов разделяемых молекул .

Данный вид хроматографии позволяет разделить практически любые заряженные молекулы, в том числе: крупные — белки , малые—молекулы нуклеотидов и аминокислот . Часто ионообменную хроматографию используют как первый этап .

Для проведения ионообменной хроматографии применяют синтетические полимеры , чаще всего на основе полистирола и полифенолов . Группировки, обуславливающие ионообменные процессы, чаще всего вводят в качестве заместителей в бензольное кольцо мономеров . Выпускаемые промышленностью ионообменные смолы имеют вид небольших полимерных шариков, которые перед использованием нужно замачивать в воде или другом элюенте . Набухание ионообменной смолы сопровождается увеличением доступности функциональных групп полимера за счёт раздвигания макромолекул молекулами элюента, как при пластификации полимера. Степень набухания ионообменной смолы регулируют как длиной макромолекул, так и степенью поперечной сшивки полимерной матрицы.

Принцип ионообменной хроматографии

Ионообменная хроматография позволяет разделить молекулы, основываясь на . имеет заряженные функциональные группы , которые взаимодействуют с анализируемыми ионизированными молекулами противоположного заряда. Этот вариант хроматографии классифицируется на два типа — катионную и анионную ионообменную хроматографию:

• Катионная ионообменная хроматография задерживает положительно заряженные катионы , так как неподвижная фаза имеет отрицательно заряженные функциональные группы, например, фосфат (PO ₄ ³⁻ ).
• Анионная ионообменная хроматография задерживает отрицательно заряженные анионы , так как неподвижная фаза имеет положительно заряженные функциональные группы, например, ⁺ N(R) ₄ .

Хроматофокусирование

Хроматофокусирование (ХФ) — метод ионообменной хроматографии, основанный на элюировании с внутренним (создаваемым внутри колонки) градиентом рН. В настоящее время используют две техники формирования градиентов рН — «классическое» хроматофокусирование и индуцирование. ХФ обычно применяют для разделения биологических объектов — белков, пептидов, аминокислот, реже азокрасителей и других цвиттер-ионных соединений. В начале 1990-х П. Н. Нестеренко и А. В. Ивановым был предложен метод концентрирования и разделения переходных металлов на одной колонке с использованием техники хроматофокусирования. Традиционно для этих целей формируют нисходящие градиенты рН на анионообменных сорбентах.

Примечания