Interested Article - Жёлтый флуоресцентный белок

Жёлтый флуоресцентный белок из коралла .

Жёлтый флуоресцентный белок ( англ. Yellow Fluorescent Protein ) — генетическая мутантная форма зелёного флуоресцентного белка ( GFP ), выделенного из медузы эквореи . Характеризуется максимумом при 514 нм и максимумом флуоресценции при 527 нм. Широко используется в качестве флуоресцентной метки в клеточной и молекулярной биологии для изучения экспрессии клеточных белков. Кроме него разработана серия других мутантных форм GFP , таких как синий, циановый и др .

Применение для FRET

Спектр поглощения YFP довольно сильно пересекается со спектром флуоресценции ( англ. Cyan Fluorescent Protein ), поэтому эти два флюорофора используются для создания биосенсоров , в основе работы которых лежит явление Фёрстеровского переноса энергии (FRET). Такие сенсоры используются для выявления определённых событий, происходящих в живых клетках. В частности, таким образом можно определять активность ферментов .

Как правило, молекула такого сенсора включает в себя 4 домена :

белок, являющийся носителем сенсора (это может быть практически любой белок);
флюорофор CFP ;
домен, меняющий свою структуру в ответ на определённое воздействие (например, фосфорилирование );
флюорофор YFP .

При облучении такого сенсора лазером с длиной волны, возбуждающей только CFP (например, 440 нм — почти не возбуждает YFP , но сильно возбуждает CFP ), можно наблюдать флуоресценцию обоих флюорофоров. После соответствующего воздействия на домен 3 происходит изменение структуры сенсора, в результате чего флюорофор YFP отдаляется от CFP и эффективность Фёрстеровского переноса падает (в зависимости от того, на какое расстояние флюорофоры были отдалены друг от друга). В результате интенсивность флуоресценции CFP возрастает, а YFP — падает. Таким образом, по отношению флуоресценции YFP к флуоресценции CFP можно количественно оценить изменение конформации биосенсора.

См. также

Примечания

Uemura, T.; Kim, H.; Saito, C.; Ebine, K.; Ueda, T.; Schulze-Lefert, P.; Nakano, A. Qa-SNAREs localized to the trans-Golgi network regulate multiple transport pathways and extracellular disease resistance in plants (англ.) // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America : journal. — 2012. — Vol. 109 , no. 5 . — P. 1784—1789 . — doi : . — . — PMC .
. Дата обращения: 7 декабря 2010. 31 октября 2010 года.

Литература

Miyawaki A., Llopis J., Heim R., et al . Fluorescent indicators for Ca2+ based on green fluorescent proteins and calmodulin (англ.) // Nature : journal. — 1997. — August ( vol. 388 , no. 6645 ). — P. 882—887 . — doi : . — .