3,3′-Диаминобензидин ( англ. DAB ) — органическое соединение, производное бензидина . Водорастворимый тетрагидрохлорид диаминобензидина используют при иммуногистохимическом окрашивании нуклеиновых кислот и белков . DAB является субстратом пероксидазы хрена .

Синтез

Коммерчески доступные препараты диаминобензидина синтезируют из 3,3′-дихлоробензидина и аммиака в присутствии медного катализатора, при высокой температуре и давлении, с обработкой кислотой.

Альтернативный путь сиснтеза осуществляется через ди бензидина уксусным ангидридом в основной среде.

(NH ₂ )C ₆ H ₄ C ₆ H ₄ (NH ₂ ) + 2(CH ₃ CO) ₂ O ⟶ (NHCOCH ₃ )C ₆ H ₄ C ₆ H ₄ (NHCOCH ₃ ) + 2CH ₃ CO ₂ H

Затем диацетат нитруют азотной кислотой до орто-динитропроизводного.

(NHCOCH ₃ )C ₆ H ₄ C ₆ H ₄ (NHCOCH ₃ ) + 2HNO ₃ ⟶ (O ₂ N)(NHCOCH ₃ )C ₆ H ₃ C ₆ H ₃ (NHCOCH ₃ )(NO ₂ ) + 2H ₂ O

Полученный продукт омыляют .

(O ₂ N)(NHCOCH ₃ )C ₆ H ₃ C ₆ H ₃ (NHCOCH ₃ )(NO ₂ ) + 2NaOH ⟶ (O ₂ N)(NH ₂ )C ₆ H ₃ C ₆ H ₃ (NH ₂ )(NO ₂ ) + 2(NaOCOCH ₃ )

Динитробензидин восстанавливают железом в соляной кислоте .

3(O ₂ N)(NH ₂ )C ₆ H ₃ C ₆ H ₃ (NH ₂ )(NO ₂ ) + 12HCl + 10Fe ⁰ ⟶ 3(NH ₂ ) ₂ C ₆ H ₃ C ₆ H ₃ (NH ₂ ) ₂ + 4Fe ₂ O ₃ + 6FeCl ₂

Восстановление также может быть проведено хлоридом олова(II) вместо железа или дитионитом натрия в метаноле .

Применение

Диаминобензидин окисляется пероксидом водорода в присутствии гемоглобина , с образованием продукта коричневого цвета. Данную особенность используют для идентификации отпечатков пальцев в крови.

В нейробиологии реакцию окисления DAB пероксидом водорода используют для окрашивания нейронов . В нейроны вводят биоцитин с авидином или стрептавидином , биотин и пероксидазу.

Примечания