Interested Article - Реактив Эллмана

Реактив Эллмана или 5,5'-дитиобис-(2-нитробензойная кислота) ( ДТНБ ) — химическое соединение, используемое для количественного анализа тиоловых групп в образце . Широко используется в биохимии для определения содержания цистеинов в белках и пептидах. Метод был предложен Джорджем Л. Эллманом в 1959 году .

Приготовление

В оригинальной статье Эллмана описывается, что он приготовил этот реактив, окислив 2-нитро-5-хлорбензальдегид до карбоновой кислоты, и ввёл тиоловую группу через сульфид натрия , а затем соединил два мономера, окислив их йодом . В наше время этот реактив можно приобрести в готовом виде.

Тест Эллмана

При реакции сульфгидрильных (тиоловых) групп с реактивом Эллмана происходит разрыв дисульфидной связи в реактиве, и образуется 2-нитро-5-тиобензойная кислота, которая легко переходит в хиноидную форму в воде при нейтральных и щелочных рH и имеет ярко-жёлтую окраску.

Реакция протекает быстро и со стехиометрией один к одному. Образовавшийся продукт в хиноидной форме (тионитрофильный анион) обладает сильным поглощением при 412 нм и может количественно определяться при помощи спектрофотометра . Для разбавленных буферных растворов используется 14,150 M ⁻¹ см ⁻¹ , а для растворов с высокой концентрацией солей, например в растворе 6-ти молярного гуанидин хлорида или мочевины — 13,700 M ⁻¹ см ⁻¹ . К несчастью, в оригинальной работе 1959 года коэффициент экстинкции для разбавленных растворов был занижен до 13,600 M ⁻¹ см ⁻¹ , и эта ошибка со временем закрепилась в литературе . Коммерческий ДТНБ не всегда полностью чист, поэтому для получения точных и воспроизводимых результатов его следует перекристаллизовать .

Реактив Эллмана позволяет измерить концентрации низкомолекулярных тиолов, таких как глутатион , при этом производить измерения можно как в чистом растворе так и в биологическом образце, например в крови .

Реактив Эллмана используют при определении активности глутатионпероксидазы; при этом для измерения активности изоферментов с широкой тиоловой специфичностью может быть использован не только глутатион, но также цистеин и гомоцистеин, благодаря равноэффективности реактива Эллмана для определения концентрации любого из тиолов.

Примечания

от 16 июля 2011 на Wayback Machine at Sigma-Aldrich
↑ Ellman G. L. Tissue sulfhydryl groups (англ.) // (англ.) ( : journal. — Elsevier , 1959. — Vol. 82 , no. 1 . — P. 70—7 . — doi : . — .
↑ Riener C. K., Kada G., Gruber H. J. Quick measurement of protein sulfhydryls with Ellman's reagent and with 4,4'-dithiodipyridine (англ.) // (англ.) ( : journal. — 2002. — Vol. 373 , no. 4—5 . — P. 266—276 . — doi : . — .
Collier H. B. Letter: A note on the molar absorptivity of reduced Ellman's reagent, 3-carboxylato-4-nitrothiophenolate (англ.) // (англ.) ( : journal. — 1973. — Vol. 56 , no. 1 . — P. 310—311 . — doi : . — .
↑ Riddles P. W., Blakeley R. L., Zerner B. Reassessment of Ellman's reagent (англ.) // Meth. Enzymol. : journal. — 1983. — Vol. 91. Methods in Enzymology . — P. 49—60 . — ISBN 978-0-12-181991-0 . — doi : . — .
Sedlak J., Lindsay R. H. Estimation of total, protein-bound, and nonprotein sulfhydryl groups in tissue with Ellman's reagent (англ.) // (англ.) ( : journal. — 1968. — Vol. 25 , no. 1 . — P. 192—205 . — doi : . — .
Разыграев А.В., Таборская К.И., Петросян М.А., Тумасова Ж.Н. (рус.) // Биомедицинская химия. — 2016. — Т. 62 , вып. 4 . — С. 431–438 . — doi : . 12 декабря 2021 года.